大香线蕉伊人久久爱,亚洲午夜精品一区二区,久久99久久99精品免视看动漫,亚洲爆乳少妇无码激情

歡迎光臨北京和一生物科技有限公司網(wǎng)站!
誠(chéng)信促進(jìn)發(fā)展,實(shí)力鑄就品牌
服務(wù)熱線:

18102086003

產(chǎn)品分類(lèi)

Product category

技術(shù)文章 / article 您的位置:網(wǎng)站首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 不同細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)的原理及區(qū)別

不同細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)的原理及區(qū)別

發(fā)布時(shí)間: 2023-11-10  點(diǎn)擊次數(shù): 1138次

常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類(lèi),一類(lèi)是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一類(lèi)是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(轉(zhuǎn)染)。前者外源 DNA /RNA不整合到宿主染色體中,因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。一般來(lái)說(shuō),超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高,在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)(依賴(lài)于各種不同的構(gòu)建)分析結(jié)果,常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白、β半乳糖苷酶等來(lái)幫助檢測(cè)。后者也稱(chēng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小。大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合,通常需要通過(guò)一些選擇性標(biāo)記,如來(lái)氨丙基轉(zhuǎn)移酶(APH;新霉素抗性基因)、潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(HPH)、胸激酶(TK)等反復(fù)篩選,得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。


轉(zhuǎn)染方法

原理

王要應(yīng)用

特點(diǎn)

DEAE-葡萄糖法

帶正電的DEAE-葡萄糖與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

相對(duì)簡(jiǎn)單、重復(fù)比磷酸鈣好,但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清且一般只用于BSC-1、CV-1、COS細(xì)胞系

磷酸鈣法

磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,染瞬轉(zhuǎn)染

不適用于元代細(xì)胞(所需的DNA濃度較高),操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差,有些細(xì)胞不適用細(xì)胞建議用CSCL梯度離心,轉(zhuǎn)染拷貝數(shù)較多

陽(yáng)離子脂質(zhì)體法

帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物,然后脂質(zhì)體上剩余的電核與細(xì)胞膜上的唾液酸殘基的負(fù)電核結(jié)合;另一種解釋是通過(guò)細(xì)胞時(shí)內(nèi)吞左右而被進(jìn)入細(xì)胞。(若DNA濃度過(guò)高,中和脂質(zhì)體表面電核,而降低了與細(xì)胞的結(jié)合能力)

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

使用方法簡(jiǎn)單,可攜帶大片段DNA,通用于各種類(lèi)型的裸露DNA或RNA,能轉(zhuǎn)染各種類(lèi)型的細(xì)胞,沒(méi)有免疫原性。雖在體外基因轉(zhuǎn)染中有很高的效率,但在體內(nèi),能被血清清除,并在肺組織內(nèi)累積,誘發(fā)強(qiáng)烈的抗炎反應(yīng),導(dǎo)致高水平的毒性,這在很大程度上限制了其應(yīng)用

陽(yáng)離子聚合物

帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,并通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

除了具有陽(yáng)離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高,操作簡(jiǎn)單,適用范圍廣,重復(fù)性好等特點(diǎn)外,還具有在體內(nèi),轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性低等特點(diǎn),是新一代的轉(zhuǎn)染試劑

病毒導(dǎo)法

逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA)

通過(guò)病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面的受體相互作用而進(jìn)入宿主細(xì)胞,之后反轉(zhuǎn)入酶啟動(dòng)合成DNA并隨機(jī)整合到宿主基因組中

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞

可用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞、原代細(xì)胞,體內(nèi)細(xì)胞等,但攜帶基因不能太大(<8kb),細(xì)胞需處分裂期,需考慮安全因素


腺病毒(雙鏈DNA)

先和細(xì)胞表面的受體結(jié)合,繼而在整合素導(dǎo)下被細(xì)胞內(nèi)吞

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞

可用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞,需考慮安全因素


Biolistic顆粒傳遞法(基因槍粒子轟擊法)

將DNA用顯微鏡金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞,DNA在胞內(nèi)逐步釋放、表達(dá)

瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

可用于:人的表皮細(xì)胞、纖維原細(xì)胞、淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞

顯微注射法

用顯微鏡操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞

電穿孔法

高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位,DNA通過(guò)膜上形成小孔導(dǎo)入

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

適用性廣,除了質(zhì)粒外,還可轉(zhuǎn)染大的基因組(>65kb)但細(xì)胞致死率高, DNA和細(xì)飽用量大,需根據(jù)不同細(xì)胞類(lèi)型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件,拷貝數(shù)較少


1-20

 

 

 

聯(lián)


中国人体艺术视频| 性一交—乱一性一A片在线播放| 亚洲精品一区二区三区中文字幕| 锦衣之下免费观看电视剧完整版 | 18禁免费无码无遮挡不卡网站| 欧美 大码 变态 另类| 欧美成人一区二免费视频| 欧美顶级少妇做爰hd| 亚洲熟妇无码av在线播放| 久久亚洲精品无码| 先の欲求不満な人妻在线| 久久久久亚洲av无码专区桃色| 日韩精品一区二区三区中文| 末成年女av片一区二区| 歪歪漫画在线观看官网免费| 日韩欧美在线综合网| 无码又爽又刺激a片涩涩动漫| 激情综合亚洲色婷婷五月app| 国产一区二区三区四区精华 | 亚洲av永久无码精品网站| 日本XXXX高清色视频在线播放| 亚洲熟妇AV日韩熟妇在线| 免费国产AV在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉| 免费无码国产欧美久久18| 人妻少妇精品视频三区二区一区 | 无码粉嫩虎白一线天在线观看| 国产伦精品免编号公布| xxx少妇厨房xxx乱| 国内精品人妻无码久久久影院导航 | 亚洲精品区无码欧美日韩| 国产精品久久人妻互换 | 人妻互换一二三区激情视频| 精品久久久无码人妻字幂| 白领人妻的屈辱交易| 少妇大叫太大太粗太爽了a片| 日本学生无码| 中文无码熟妇人妻av在线| 久久久久亚洲av无码专区首| 国产精品国产精品国产专区不卡| 人妻丰满熟妇av无码区hd|